網(wǎng)站首頁>新聞動(dòng)態(tài) > 色譜柱的使用和維護(hù)

色譜柱的使用和維護(hù)

瀏覽： 2147| 更新時(shí)間：2018-01-25 |

　　色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操縱過程中，需要留意下列題目，以維護(hù)色譜柱。

　　①　避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的忽然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的忽然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩(如前所述)。

　　②　應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?br />

　　③　一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除往留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。

　　④　選擇使用適宜的活動(dòng)相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使活動(dòng)相在進(jìn)進(jìn)分析柱之前預(yù)先被硅膠"飽和"，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

　　⑤　避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注進(jìn)柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

　　⑥　經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保存在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對流路系統(tǒng)中活動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種活動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。

　　下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。甲醇能洗往殘留的強(qiáng)極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。假如下一步分析用的活動(dòng)相不含緩沖液，那么可以省略zui后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗往殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇(乙腈)沖洗時(shí)重復(fù)注射100~200μl四氫呋喃數(shù)次有助于除往強(qiáng)疏水性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除往類脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數(shù)次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除往蛋白質(zhì)污染。

　　陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除往交換性能強(qiáng)的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷(除往吸附在固定相表面的有機(jī)物)、甲醇、水依次沖洗。

　　⑦　保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)布滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。盡對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時(shí)間。

　　⑧　色譜柱使用過程中，假如壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)進(jìn)柱內(nèi)，使柱頭被污染；假如柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。

　　在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(留意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平。

上一條：氘燈和氙燈的區(qū)別

下一條：色譜柱的再生